1、悬浮细胞通常是4x10 4/ml ，帖壁细胞通常是5x10 4/ml 产生差别的原因有多种。在加细胞时，细胞沉淀下来，导致两孔细胞数不同。我们通常用磁力转子对细胞缓慢搅拌，时刻保持细胞处于悬浮状态。
2、做MTT时，用96-well plates的话，一般每孔分5000个或10000个细胞，加100ul培养基，培养24h后，加入不同浓度的药物，每个浓度的药物一般设3-6个平行样。给药24或者72h后，加入MTT，使其终浓度为5%（比如5mg/ml的MTT加10ul）。
3、mtt实验步骤： 胰酶消化对数期细胞，血清中止消化，移液枪吹打至细胞悬浮，细胞悬液1000rpm离心5分钟，弃上清，重悬沉淀制成细胞悬液。细胞计数调整其浓度至5×104/ml（具体细胞密度根据需求适当调整）。 将细胞悬液制备好后，轻轻混匀，植入96孔板。
4、⒈选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。
四甲基偶氮唑盐比色法（MTT方法），是通过快速简便的颜色反应来检测细胞存活数量。其原理是MTT可作为哺乳类动物细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶的底物。
MTT法是二十世纪八十年代发展起来的一种快速、 简便的以活细胞代谢物还原剂 MTT噻唑蓝为基础的一种检测细胞数量的方法。由 Mosmann在 1983年首先在鼠淋巴细胞系的研究中应用于检测 I L - 2等细胞因子对细胞存活和增殖的影响。
四甲基偶氮唑盐比色法（MTT 法） 由Mosmanm[1 ] 在1983 年首创，其原理是活细胞内的线粒体琥珀酸脱氢酶可将MTT 还原成蓝紫色甲瓒，而且形成的量与活细胞数量成正比。
用台盼兰染细胞，死细胞着色，活细胞不着色，从而可以区分死细胞与活细胞。利用细胞内某些酶与特定的试剂发生显色反应，也可测定细胞相对数和相对活力。
伊红Y和苯胺黑 和台盼蓝染色原理相似 细胞损伤或死亡时，某些染料可穿透细胞膜，与解体的DNA结合，使其着色。而活细胞则能阻止该染料进入细胞内。MTT比色实验 活细胞线粒体琥珀酸脱氢酶催化四甲基偶氮唑盐（MTT），还原成紫色不溶性结晶物，沉积于细胞中。
大黄酸展现出强大的抗癌特性，特别针对肺癌细胞A549。使用MTT法（四甲基偶氮唑盐比色法）的研究揭示，大黄酸显著抑制了这些细胞的生长。凋亡实验显示，大黄酸处理后的细胞呈现出显著的凋亡特征，如染色质边缘化、形成凋亡小体和核固缩，证实了它对癌细胞凋亡的诱导作用。
1、测一周不换液细胞还能活吗？——MTT加进去之后只要4小时孵育时间就可加DMSO，之前的时间是刺激时间，应按实验要求自己掌握换液频率。
2、在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT吸光度最好在0-0.7范围内，MTT一般最好现用现配，过滤后4℃避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20℃长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
3、置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。镜下观察蓝紫色结晶已溶解就可以测了。不能太晚测，MTT会变质。
